TÉCNICA Imunofluorescência

Imunofluorescência Indireta - Princípios do Teste

Antígenos expressos em células ou tecidos são fixados em uma superfície/lâmina (fase sólida). O soro do paciente é então adicionado na superfície para que anticorpos contra o antígeno pesquisado se liguem, formando um sítio de ligação antígeno-anticorpo.

Em uma segunda etapa, anticorpos marcados com fluoresceína e direcionados contra os anticorpos do paciente são adicionados a superfície, de modo que se liguem aos anticorpos do paciente. A fluoresceína é um fluoróforo que produz uma marcação visível ao se utilizar um microscópio de fluorescência.

A intensidade da marcação é proporcional a quantidade de anticorpos presentes na amostra do paciente. Assim, amostras positivas podem ser tituladas em etapas. 

Vantagens do Teste de Imunofluorescência Indireta

• Alta especificidade: amostras positivas e negativas produzem ampla diferença de intensidade de fluorescência

• O espectro completo dos antígenos presentes no substrato original está disponível, permitindo assim a detecção de um grande número de anticorpos, atingindo uma taxa muito maior de detecção.

• Permite a detecção simultânea de anticorpos contra diversos antígenos bioquimicamente diferentes em um único substrato.

Inovações para a padronização e modernização da Imunofluorescência Indireta

• Técnica de ativação: lâminas de vidro ativadas fisicamente ou quimicamente são cobertas com cultura de células e secções de tecidos. Secções resfriadas de tecido são fixadas à superfície de vidro por ligação covalente, aumentando a adesão em mais de cem vezes, evitando que os substratos sejam reparados.

   

• Tecnologia BIOCHIP: lâminas de vidro cobertas com substrato biológico são cortadas em fragmentos milimétricos. Isso torna possível obter dez ou mais preparados homogêneos de alta qualidade por corte de tecido e, no caso de substrato com cultura de células, milhares de preparados.

   

• BIOCHIP Mosaics™: usando diversos BIOCHIPs cobertos com diferentes substratos lado a lado em um mesmo campo de reação, anticorpos contra vários órgãos ou agentes infecciosos podem ser investigados simultaneamente. Perfis detalhados de anticorpos podem assim ser estabelecidos com menos esforço, permitindo a determinação de resultados em diferentes substratos.

   

• Técnica TITERPLANE™: amostras ou reagentes são aplicados aos campos de reação em uma bandeja. As lâminas BIOCHIP são então colocadas nas cavidades presentes na bandeja de reagentes onde todos os BIOCHIPs entram em contato com os fluidos e as reações individuais começam simultaneamente. Todos os fluidos são depositados em um espaço fechado, não é necessário utilizar a câmara úmida convencional.