Imunofluorescência

Técnicas - As reações imunológicas que envolvem a ligação antígeno-anticorpo podem ser visualizadas ou quantificadas por meio de diferentes marcadores para o antígeno ou para o anticorpo.

Imunofluorescência Indireta - Princípios do Teste

Antígenos expressos em células ou tecidos são fixados em uma superfície/lâmina (fase sólida). O soro do paciente é então adicionado na superfície para que anticorpos contra o antígeno pesquisado se liguem, formando um sítio de ligação antígeno-anticorpo.

Em uma segunda etapa, anticorpos marcados com fluoresceína e direcionados contra os anticorpos do paciente são adicionados a superfície, de modo que se liguem aos anticorpos do paciente. A fluoresceína é um fluoróforo que produz uma marcação visível ao se utilizar um microscópio de fluorescência.

A intensidade da marcação é proporcional a quantidade de anticorpos presentes na amostra do paciente. Assim, amostras positivas podem ser tituladas em etapas. 

Vantagens do Teste de Imunofluorescência Indireta

• Alta especificidade: amostras positivas e negativas produzem ampla diferença de intensidade de fluorescência

• O espectro completo dos antígenos presentes no substrato original está disponível, permitindo assim a detecção de um grande número de anticorpos, atingindo uma taxa muito maior de detecção.

• Permite a detecção simultânea de anticorpos contra diversos antígenos bioquimicamente diferentes em um único substrato.

DIAGNOSTICO POR ELISA 

TÉCNICA ELISA

Cobertas com antígenos puros são usadas como fase sólida contendo antígenos.

A Microplaca ELISA

O teste de ELISA baseia-se em reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas (teste imunoenzimático).
A enzima mais comumente usada nesta prova á a peroxidase, responsável por catalisar a reação de desdobramento da água oxigenada (H2O2) em H2O mais O2.

Princípio do teste

O antígeno purificado fica aderido aos poços da microplaca de poliestireno (fase sólida). Em seguida, adiciona-se o soro do paciente e, caso a amostra seja positiva, anticorpos específicos se ligam aos antígenos da fase sólida.

Na segunda etapa, inclui-se um segundo anticorpo dirigido contra as imunoglobulinas da espécie, que é ligado à peroxidase (conjugado).

Ao adicionar-se o substrato apropriado para a enzima, ocorre a reação de cor. Os orifícios onde ocorreu a reação antígeno-anticorpo apresentam uma coloração. A intensidade da cor produzida é proporcional à concentração de anticorpos na amostra de soro.

Vantagens

• ELISA monoespecífico (imunoensaio enzimático com um único antígeno) proporciona material in-vitro quantitativo para detecção de anticorpos. O perfil de ELISA proporciona um material in-vitro semiquantitativo para detecção de diferentes anticorpos em uma única microplaca.

• A fase sólida do Pool ELISA é coberta com uma composição de antígenos para detecção semiquantitativa de anticorpos cuja especificidade deve ser investigada em sequência através de material monoespecífico.

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